产品货号:
KL221222
中文名称:
土壤RNA提取试剂盒
英文名称:
Soil RNA Purification Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用化学裂解结合玻璃珠机械裂解细胞,可以有效裂解土壤中存在的大量有坚硬细胞壁的真菌和孢子。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。

由于土壤中有机质含量丰富,尤其是其中的腐殖酸对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用,所以从土壤微生物提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。

- 去腐殖酸污染效果好,RNA纯度更高,平均OD260/280一般都在2.0左右。
- 快捷,处理一个样品只需要约十几分钟。
- 性价比高于进口的土壤RNA提取产品。
- 可以进行无氯仿操作,只是纯度稍微降低,但不影响使用。
- 本制品只能用于科研。

| 组分 | 规格 |
| 土壤RNA纯化溶液A | 50mL |
| 土壤RNA纯化溶液B | 15mL |
| 土壤RNA纯化溶液C | 25mL |
| 酸洗玻璃珠(100~1000μm) | 25g |
| 氯仿替代品 | 10mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
保存:室温,其中溶液B需要4℃保存,有效期1年。

本试剂盒足够50次微量提取,每次可以处理0.3~0.5g土壤样本。

- 称取0.3~0.5g的土壤,加入1mL土壤RNA纯化溶液A,震荡器上剧烈震荡5~10分钟。
- 一定要让管底的土壤震荡起来。
- 土壤RNA纯化溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
- 一定要让管底的土壤震荡起来。
- 稍微静置后将上层溶液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。
- 在离心管中加入0.3mL的土壤RNA纯化溶液B和0.2mL氯仿替代品,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。
- 振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温13000×g离心5分钟,两相间将有约5~10mm厚的细胞破碎物。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。
- 加入等体积的土壤RNA纯化溶液C,充分颠倒混匀。
- 将一半的溶液(如果有沉淀,则先混匀后一起取用)转移到离心吸附柱中,13000×g室温离心半分钟,弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液(如果有沉淀,则先混匀后一起取用)转移到同一离心吸附柱中,13000×g室温离心半分钟,弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
- 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一个自备的干净的RNase-free收集管中,然后加入50μL RNA洗脱液,室温放置1分钟。
- 13000×g室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测:土壤中的游离RNA高度断裂,电泳时根本无法形成清晰条带,因此只能进行RT-PCR检测,由于土壤中的RNA被土壤微生物分泌的RNase高度降解成小片段,能回收回来的RNA浓度也较低,也不建议通过测OD判断浓度。
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